Uma repetição do modelo de expansão GAA da ataxia de Friedreich recapitula o contexto genómico e permite a seleção rápida de compostos terapêuticos.
Autor: MM Lufino et al
Departamento de Fisiologia, Anatomia e Genética,
Universidade de Oxford, Edifício Le Gros Clark, South Parks Road, Oxford OX1
3QX, Reino Unido.
Resumo
A ataxia de Friedreich (FRDA) é causada por grandes
expansões GAA no intron 1 do gene frataxina (FXN), que levam à expressão
reduzida de FXN através de um mecanismo que não é totalmente conhecido.
Compreender esse mecanismo é essencial para a identificação de novas terapias
para a FRDA, e isto pode ser acelerado pelo desenvolvimento de modelos celulares
que recapitulam o contexto genómico do locus FXN e permitem a comparação direta
dos loci FXN normais e expandidos, com rápida deteção dos níveis de frataxina.
Aqui descrevemos o desenvolvimento do primeiro modelo de FRDA com ADN genómico
FXN GAA-expandido. Nós modificamos os vetores BAC carregando todo o locus de ADN
genómico FXN através da inserção do gene da luciferase na 5a exon do gene FXN
(pBAC-FXN-Luc) e substituir as seis repetições GAA presentes no vetor com uma
expansão de repetição ∼310 GAA (pBAC-FXN-GAA-Luc). Geramos linhas clonais de células humanas
carregando os dois vetores usando integração específica para permitir a
comparação direta dos loci FXN normais e expandidos. Demonstramos que a
presença de repetições GAA expandidas recapitulam as modificações epigenéticas
e a repressão da expressão genética, visto na FRDA. Aplicamos o modelo expandido
GAA na triagem de uma biblioteca de novas moléculas pequenas e identificámos
uma molécula que regula a expressão FXN nas células primárias num paciente com FRDA
e restaura a acetilação da histona normal em torno das repetições GAA. Estes
resultados sugerem o potencial do uso de modelos genómicos de células para o
estudo da FRDA e a identificação de novas terapias, combinando a expressão
fisiologicamente relevante com as vantagens da expressão quantitativa do gene.
Comentários
Enviar um comentário