Imuno-ensaio de alto rendimento para o diagnóstico bioquímico da Ataxia de Friedreich em manchas de sangue seco e sangue inteiro
Devin Oglesbee,
Charles Kroll, Oleksandr Gakh, Eric c. Deutsch, David r. Lynch, Ralitza
Gavrilova, Silvia Tortorelli, Kimiyo Raymond, Dimitar Gavrilov, Piero Rinaldo,
Dietrich Matern e Grazia Isaya
Resumo
Fundo: A ataxia de
Friedreich (FRDA) é causada por concentrações reduzidas de frataxina (FXN). Um
diagnóstico clínico é tipicamente confirmado por ensaios baseados em ADN para
expansões de repetições GAA ou mutações no gene FXN (frataxina); no entanto,
estes ensaios não são aplicáveis ao acompanhamento terapêutico e rastreio da
população. Para facilitar o diagnóstico e acompanhamento de pacientes com FRDA,
desenvolvemos um imuno-ensaio para medição da FXN.
Métodos: Foram usados pares
de anticorpos para capturar FXN e uma proteína de controlo interno,
ceruloplasmina (CP), em 15 µ l de sangue total (WB) ou um soco de 3 mm de uma
mancha de sangue seco (DBS). As amostras foram processadas num analisador
Luminex LX200 e validadas de acordo com critérios padrão.
Resultados: A recuperação média
de FXN das amostras de WB e DBS foi de 99%. Intra e inter valores de imprecisão
(CV) foram 4,9%-13% e 9,8%-16%, respetivamente. O limite FXN de deteção foi
0,07 ng/mL, e o intervalo reportável de concentrações foi 2–200 ng/mL.
Referência adultas e pediátricas de concentrações de FXN variaram de 15 a 82
ng/mL (mediana, 33 ng/mL) para DBS e WB. O intervalo de concentração FXN foi
12-22 ng/mL (mediana, 15 ng/mL) para portadores de FRDA e 1 – 26 ng/mL (mediana
de 5 ng/mL) para pacientes de FRDA. A medição da relação FXN/CP aumentou a
capacidade de distinguir entre pacientes, portadores e a população de
referência.
Conclusões: Este ensaio é aplicável
para o diagnóstico e acompanhamento terapêutico da FRDA. Este ensaio pode medir
a FXN e a proteína de controlo CP em amostras de WB e DBS com requisitos de
amostra mínima, criando o potencial para seleção de população de alto
rendimento da FRDA.
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